ផលិតផល
ឧបករណ៍រកឃើញ SARS-Cov-2-RT-PCR Lifecosm សម្រាប់ 2019-nCoV
ការប្រើប្រាស់រំពឹងទុក
កញ្ចប់នេះត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការរកឃើញលក្ខណៈគុណភាពនៃមេរោគថ្មី (2019-nCoV) ដោយប្រើឧបករណ៍ជូតបំពង់ក ថង់ទឹកមាត់ បំពង់ខ្យល់ ទឹករំអិល ទងសួត ទឹករំអិល។ លទ្ធផលរកឃើញនៃផលិតផលនេះគឺសម្រាប់តែជាឯកសារយោងគ្លីនិកប៉ុណ្ណោះ ហើយវាមិនគួរប្រើតែមួយមុខនោះទេ។ ភ័ស្តុតាងសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ និងការព្យាបាលតាមគ្លីនិក។ ការវិភាគដ៏ទូលំទូលាយនៃស្ថានភាពត្រូវបានណែនាំក្នុងការរួមផ្សំជាមួយនឹងការបង្ហាញគ្លីនិករបស់អ្នកជំងឺ និងការធ្វើតេស្តមន្ទីរពិសោធន៍ផ្សេងទៀត។
គោលការណ៍អធិការកិច្ច
ឧបករណ៍នេះត្រូវបានផ្អែកលើបច្ចេកវិទ្យា RT-PCR មួយជំហាន។ជាការពិត ហ្សែន 2019-nCoV (2019-nCoV) ORF1ab និង N ត្រូវបានជ្រើសរើសជាតំបន់គោលដៅពង្រីក។primers ជាក់លាក់ និង fluorescent probes (N gene probes are labeled with FAM and ORF1ab probes are labeled with HEX) ត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីរកមើលមេរោគប្រភេទថ្មី 2019 RNA នៅក្នុងគំរូ។ឧបករណ៍នេះក៏រួមបញ្ចូលផងដែរនូវប្រព័ន្ធរាវរកការត្រួតពិនិត្យខាងក្នុង endogenous (ការស៊ើបអង្កេតហ្សែនត្រួតពិនិត្យខាងក្នុងដែលមានស្លាក CY5) ដើម្បីតាមដានដំណើរការនៃការប្រមូលគំរូ ការពង្រីក RNA និង PCR ដោយកាត់បន្ថយលទ្ធផលអវិជ្ជមានមិនពិត។
សមាសធាតុសំខាន់ៗ
| សមាសធាតុ | កម្រិតសំឡេង(48T/កញ្ចប់) |
| ដំណោះស្រាយប្រតិកម្ម RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| ការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន | 1500µl |
| nCOV ការគ្រប់គ្រងវិជ្ជមាន (l ORF1ab N ហ្សែន) | 1500µl |
សារធាតុប្រតិកម្មផ្ទាល់ខ្លួន៖ ការទាញយក RNA ឬសារធាតុបន្សុត។ការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន/វិជ្ជមាន៖ ការគ្រប់គ្រងវិជ្ជមានគឺ RNA ដែលមានបំណែកគោលដៅ ខណៈដែលការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមានគឺជាទឹកដែលគ្មានអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក។ក្នុងអំឡុងពេលប្រើប្រាស់ពួកគេគួរតែចូលរួមក្នុងការស្រង់ចេញហើយគួរតែត្រូវបានចាត់ទុកថាជាជំងឺឆ្លង។ពួកគេគួរតែត្រូវបានដោះស្រាយនិងបោះចោលស្របតាមបទប្បញ្ញត្តិពាក់ព័ន្ធ។
ហ្សែនយោងខាងក្នុងគឺជាហ្សែន RnaseP របស់មនុស្ស។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក និងកាលបរិច្ឆេទផុតកំណត់
-20±5℃ ជៀសវាងការកកម្តងហើយម្តងទៀត និងរលាយលើសពី 5 ដង មានសុពលភាព 6 ខែ។
ឧបករណ៍ដែលអាចអនុវត្តបាន។
ជាមួយ FAM / HEX / CY5 និងឧបករណ៍ PCR fluorescent ពហុឆានែលផ្សេងទៀត។
តម្រូវការគំរូ
1. ប្រភេទសំណាកដែលអាចអនុវត្តបាន៖ បំពង់កបំពង់ក, ថង់ទឹកមាត់ច្រមុះ, សារធាតុរាវ bronchoalveolar lavage, កំហាក។
2. ការប្រមូលសំណាក (បច្ចេកទេស aseptic)
pharyngeal swab: ជូត tonsils និងជញ្ជាំង pharyngeal ក្រោយដោយ swabs ពីរក្នុងពេលតែមួយ បន្ទាប់មកជ្រមុជក្បាល swab នៅក្នុងបំពង់សាកល្បងដែលមានដំណោះស្រាយសំណាក។
Sputum: បន្ទាប់ពីអ្នកជំងឺមានការក្អកខ្លាំង ចូរប្រមូលកំហាកដែលក្អកនៅក្នុងបំពង់សាកល្បងមួកវីសដែលមានដំណោះស្រាយសំណាក។សារធាតុរាវ bronchoalveolar lavage: គំរូដោយអ្នកជំនាញវេជ្ជសាស្ត្រ។3. ការផ្ទុកនិងការដឹកជញ្ជូនគំរូ
សំណាកសម្រាប់ការញែកមេរោគ និងការធ្វើតេស្ត RNA គួរតែត្រូវបានធ្វើតេស្តឱ្យបានឆាប់តាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។សំណាកដែលអាចត្រូវបានរកឃើញក្នុងរយៈពេល 24 ម៉ោងអាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅ 4 ℃;ដែលមិនអាចត្រូវបានរកឃើញក្នុងរយៈពេល 24
ម៉ោងគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -70 ℃ឬខាងក្រោម (ប្រសិនបើមិនមានលក្ខខណ្ឌផ្ទុកនៃ -70 ℃, ពួកគេគួរតែត្រូវបាន
រក្សាទុកជាបណ្តោះអាសន្ននៅ -20 ℃ ទូទឹកកក) ។សំណាកគួរជៀសវាងការកកម្តងហើយម្តងទៀត និងរលាយក្នុងអំឡុងពេលដឹកជញ្ជូន។សំណាកគួរតែត្រូវបានបញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍ឱ្យបានឆាប់តាមដែលអាចធ្វើទៅបានបន្ទាប់ពីការប្រមូល។ប្រសិនបើគំរូត្រូវដឹកជញ្ជូនក្នុងចម្ងាយឆ្ងាយ ការទុកដាក់ទឹកកកស្ងួតត្រូវបានណែនាំ។
វិធីសាស្រ្តសាកល្បង
1 ដំណើរការគំរូ និងការទាញយក RNA (តំបន់ដំណើរការគំរូ)
វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យយកគំរូរាវ 200μl សម្រាប់ការទាញយក RNA ។សម្រាប់ជំហាននៃការទាញយកដែលពាក់ព័ន្ធ សូមមើលការណែនាំរបស់ឧបករណ៍ទាញយក RNA ពាណិជ្ជកម្ម។ទាំងអវិជ្ជមាននិងអវិជ្ជមាន
ការត្រួតពិនិត្យនៅក្នុងឧបករណ៍នេះត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងការស្រង់ចេញ។
2 ការរៀបចំ reagent PCR (ផ្ទៃរៀបចំ reagent)
2.1 យកសមាសធាតុទាំងអស់ចេញពីឧបករណ៍ ហើយរលាយ ហើយលាយនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។Centrifuge នៅ 8,000 rpm សម្រាប់ពីរបីវិនាទីមុនពេលប្រើ;គណនាបរិមាណដែលត្រូវការនៃសារធាតុប្រតិកម្ម ហើយប្រព័ន្ធប្រតិកម្មត្រូវបានរៀបចំដូចបានបង្ហាញក្នុងតារាងខាងក្រោម៖
| សមាសធាតុ | ការបម្រើ N (ប្រព័ន្ធ 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| ដំណោះស្រាយប្រតិកម្ម RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = ចំនួននៃគំរូដែលបានសាកល្បង + 1 (ការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន) + 1 (nCOVការត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន) | |
2.2 បន្ទាប់ពីលាយសមាសធាតុយ៉ាងហ្មត់ចត់រួច ច្របាច់កណ្តាលក្នុងរយៈពេលខ្លីដើម្បីឱ្យវត្ថុរាវទាំងអស់នៅលើជញ្ជាំងបំពង់ធ្លាក់ទៅបាតបំពង់ ហើយបន្ទាប់មកបញ្ចូលប្រព័ន្ធពង្រីក 20 µl ទៅក្នុងបំពង់ PCR ។
3 គំរូ (តំបន់រៀបចំគំរូ)
បន្ថែម 5μl នៃការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាននិងវិជ្ជមានបន្ទាប់ពីការស្រង់ចេញ។RNA នៃគំរូដែលត្រូវធ្វើតេស្តត្រូវបានបន្ថែមទៅបំពង់ប្រតិកម្ម PCR ។
បិទបំពង់ឱ្យតឹង ហើយផ្ចិតនៅល្បឿន 8,000 rpm រយៈពេលពីរបីវិនាទី មុនពេលផ្ទេរវាទៅតំបន់រកឃើញការពង្រីក។
4 PCR amplification (តំបន់រកឃើញពង្រីក)
4.1 ដាក់បំពង់ប្រតិកម្មក្នុងក្រឡាគំរូនៃឧបករណ៍ ហើយកំណត់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រដូចខាងក្រោមៈ
| ដំណាក់កាល | វដ្ត ចំនួន | សីតុណ្ហភាព(°C) | ពេលវេលា | ការប្រមូលគេហទំព័រ |
| បញ្ច្រាសប្រតិចារិក | 1 | 42 | 10 នាទី | - |
| មុន denaturationn | 1 | 95 | 1 នាទី | - |
| វដ្ត | 45 | 95 | 15 វិ | - |
| 60 | 30s | ការប្រមូលទិន្នន័យ |
ការជ្រើសរើសឆានែលស្វែងរកឧបករណ៍៖ ជ្រើសរើសឆានែល FAM, HEX, CY5 សម្រាប់សញ្ញា fluorescence ។សម្រាប់សេចក្តីយោង fluorescent NONE សូមកុំជ្រើសរើស ROX។
5 ការវិភាគលទ្ធផល (សូមមើលការណែនាំពិសោធន៍នៃឧបករណ៍នីមួយៗសម្រាប់ការកំណត់)
បន្ទាប់ពីប្រតិកម្មសូមរក្សាទុកលទ្ធផល។បន្ទាប់ពីការវិភាគ កែតម្រូវតម្លៃចាប់ផ្តើម តម្លៃបញ្ចប់ និងតម្លៃកម្រិតនៃបន្ទាត់គោលដោយយោងតាមរូបភាព (អ្នកប្រើប្រាស់អាចកែតម្រូវតាមស្ថានភាពជាក់ស្តែង តម្លៃចាប់ផ្តើមអាចកំណត់ទៅ 3~15 តម្លៃបញ្ចប់អាចកំណត់ទៅ 5 ~ 20, ការកែតម្រូវ) នៅក្នុងក្រាហ្វលោការីត នៅកម្រិតនៃបង្អួច បន្ទាត់កម្រិតចាប់ផ្ដើមស្ថិតនៅក្នុងដំណាក់កាលលោការីត ហើយខ្សែកោងពង្រីកនៃវត្ថុបញ្ជាអវិជ្ជមានគឺជាបន្ទាត់ត្រង់ ឬក្រោមបន្ទាត់កម្រិត)។
6 ការត្រួតពិនិត្យ Quauty (ការត្រួតពិនិត្យនីតិវិធីមួយត្រូវបានរួមបញ្ចូលនៅក្នុងការធ្វើតេស្ត) ការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន: មិនមានខ្សែកោងពង្រីកជាក់ស្តែងសម្រាប់បណ្តាញរកឃើញ FAM, HEX, CY5
COV ការត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន៖ ខ្សែកោងពង្រីកជាក់ស្តែងនៃបណ្តាញរកឃើញ FAM និង HEX តម្លៃ Ct≤32 ប៉ុន្តែមិនមានខ្សែកោងពង្រីកនៃឆានែល CY5 ទេ។
តម្រូវការខាងលើត្រូវតែបំពេញក្នុងពេលដំណាលគ្នាក្នុងការពិសោធន៍ដូចគ្នា;បើមិនដូច្នេះទេ ការពិសោធន៍មិនត្រឹមត្រូវទេ ហើយចាំបាច់ត្រូវធ្វើម្តងទៀត។
7 ការកំណត់លទ្ធផល។
7.1 ប្រសិនបើមិនមានខ្សែកោង amplification ឬតម្លៃ Ct> 40 នៅក្នុងបណ្តាញ FAM និង HEX នៃគំរូតេស្ត ហើយមានខ្សែកោង amplification នៅក្នុងឆានែល CY5 នោះ វាអាចត្រូវបានវិនិច្ឆ័យថាមិនមានមេរោគថ្មី 2019 (2019-nCoV) ទេ។ RNA នៅក្នុងគំរូ;
.2 ប្រសិនបើគំរូតេស្តមានខ្សែកោងពង្រីកជាក់ស្តែងនៅក្នុងបណ្តាញ FAM និង HEX ហើយតម្លៃ Ct គឺ ≤40 វាអាចត្រូវបានវិនិច្ឆ័យថាគំរូគឺវិជ្ជមានសម្រាប់មេរោគថ្មីឆ្នាំ 2019 (2019-nCoV)។
7.3 ប្រសិនបើគំរូតេស្តមានខ្សែកោង amplification ច្បាស់លាស់តែនៅក្នុង channel មួយនៃ FAM ឬ HEX ហើយតម្លៃ Ct គឺ ≤40 ហើយមិនមានខ្សែកោង amplification នៅក្នុង channel ផ្សេងទៀតទេ លទ្ធផលត្រូវតែធ្វើតេស្តម្តងទៀត។ប្រសិនបើលទ្ធផលតេស្តឡើងវិញមានភាពស៊ីសង្វាក់គ្នា គំរូអាចត្រូវបានវិនិច្ឆ័យថាវិជ្ជមានសម្រាប់ថ្មី។
មេរោគ 2019 (2019-nCoV) ។ប្រសិនបើលទ្ធផលតេស្តឡើងវិញគឺអវិជ្ជមាន វាអាចត្រូវបានវិនិច្ឆ័យថាសំណាកគឺអវិជ្ជមានសម្រាប់មេរោគថ្មី 2019 (2019-nCoV)។
តម្លៃវិនិច្ឆ័យវិជ្ជមាន
វិធីសាស្ត្រខ្សែកោង ROC ត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់តម្លៃយោង CT របស់ឧបករណ៍ ហើយតម្លៃយោងការគ្រប់គ្រងខាងក្នុងគឺ 40 ។
ការបកស្រាយលទ្ធផលតេស្ត
1.ការពិសោធន៍នីមួយៗគួរតែត្រូវបានសាកល្បងសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន និងវិជ្ជមាន។លទ្ធផលតេស្តអាចកំណត់បានលុះត្រាតែការត្រួតពិនិត្យបំពេញតាមតម្រូវការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
2.នៅពេលដែលបណ្តាញរាវរក FAM និង HEX មានភាពវិជ្ជមាន លទ្ធផលពីឆានែល CY5 (ឆានែលត្រួតពិនិត្យខាងក្នុង) អាចអវិជ្ជមានដោយសារតែការប្រកួតប្រជែងប្រព័ន្ធ។
3.នៅពេលដែលលទ្ធផលនៃការគ្រប់គ្រងខាងក្នុងគឺអវិជ្ជមាន ប្រសិនបើបណ្តាញរកឃើញ FAM និង HEX របស់បំពង់តេស្តគឺអវិជ្ជមានផងដែរ វាមានន័យថាប្រព័ន្ធត្រូវបានបិទ ឬប្រតិបត្តិការខុស ការធ្វើតេស្តគឺមិនត្រឹមត្រូវទេ។ដូច្នេះសំណាកចាំបាច់ត្រូវធ្វើតេស្តឡើងវិញ។
